ນ້ ຳ ມັນ Saposhnikovia divaricata ບໍລິສຸດ ສຳ ລັບທຽນໄຂແລະສະບູທີ່ຜະລິດນ້ ຳ ມັນທີ່ ຈຳ ເປັນທີ່ແຜ່ກະຈາຍຂາຍຍົກ ໃໝ່ ສຳ ລັບເຄື່ອງກະຈາຍເຕົາລີດ

ລາຍ​ລະ​ອຽດ​ສັ້ນ​:

 

2.1. ການກະກຽມ SDE

ຫົວຂອງ SD ໄດ້ຊື້ເປັນປະເພດຫຍ້າແຫ້ງຈາກບໍລິສັດ Hanherb (Guri, ເກົາຫຼີ). ວັດ​ສະ​ດຸ​ພືດ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ຢັ້ງ​ຢືນ​ວິ​ຊາ​ການ​ໂດຍ​ທ່ານ​ດ​ຣ Go-Ya Choi ຂອງ​ສະ​ຖາ​ບັນ​ການ​ແພດ​ຕະ​ເວັນ​ອອກ​ຂອງ​ເກົາ​ຫຼີ (KIOM). ຕົວຢ່າງໃບເກັບເງິນ (ໝາຍເລກ 2014 SDE-6) ຖືກຝາກໄວ້ໃນຄັງສະສົມຂອງແຫຼ່ງສະໝຸນໄພມາດຕະຖານເກົາຫຼີ. ຫົວເຫວີຍແຫ້ງຂອງ SD (320 g) ໄດ້ຖືກສະກັດສອງຄັ້ງດ້ວຍ 70% ethanol (ກັບ 2 h reflux) ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນສານສະກັດຈາກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນທີ່ຫຼຸດລົງ. ການຕົ້ມດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກກັ່ນຕອງ, lyophilized, ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 4 ° C. ຜົນຜະລິດຂອງສານສະກັດຈາກແຫ້ງຈາກວັດຖຸດິບດິບແມ່ນ 48.13% (w/w).

 

2.2. ການວິເຄາະປະລິມານປະສິດທິພາບສູງຂອງ Liquid Chromatography (HPLC).

ການວິເຄາະ Chromatographic ໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍລະບົບ HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) ແລະເຄື່ອງກວດຈັບອາເຣ photodiode. ສໍາລັບການວິເຄາະ HPLC ຂອງ SDE, ຕົ້ນຕໍ.Oມາດຕະຖານ glucosylcimifugin ໄດ້ຊື້ຈາກສະຖາບັນສົ່ງເສີມການຢາພື້ນເມືອງເກົາຫຼີ (Gyeongsan, ເກົາຫຼີ), ແລະວິນາທີ-O-glucosylhamaudol ແລະ 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol ຖືກແຍກຢູ່ພາຍໃນຫ້ອງທົດລອງຂອງພວກເຮົາ ແລະຖືກຈຳແນກໂດຍການວິເຄາະສະເປັກ, ຕົ້ນຕໍໂດຍ NMR ແລະ MS.

ຕົວຢ່າງ SDE (0.1 mg) ຖືກລະລາຍໃນ 70% ethanol (10 mL). ການແຍກ Chromatographic ໄດ້ຖືກປະຕິບັດດ້ວຍຖັນ XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 ມມ, 5.μm, Waters Co., Milford, MA, USA). ໄລຍະມືຖືປະກອບດ້ວຍ acetonitrile (A) ແລະ 0.1% acetic acid ໃນນ້ໍາ (B) ໃນອັດຕາການໄຫຼຂອງ 1.0 mL / ນາທີ. ໂປຣແກມ gradient ແບບ multistep ຖືກໃຊ້ດັ່ງນີ້: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 ນາທີ), 20% A (10–23 ນາທີ), ແລະ 20–65% A (23–40 ນາທີ) ). ຄວາມຍາວຂອງຄື້ນກວດຈັບໄດ້ຖືກສະແກນຢູ່ທີ່ 210-400 nm ແລະບັນທຶກຢູ່ທີ່ 254 nm. ປະລິມານສີດແມ່ນ 10.0μL. ວິທີແກ້ໄຂມາດຕະຖານສໍາລັບການກໍານົດສາມ chromones ໄດ້ຖືກກະກຽມຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 7.781 mg / mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), ແລະ 31.125 mg/mL (ວິນາທີ-O-glucosylhamaudol) ໃນ methanol ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ° C.

2.3. ການປະເມີນຜົນຂອງກິດຈະກໍາຕ້ານການອັກເສບໃນ Vitro

2.3.1. ວັດທະນະທໍາຈຸລັງແລະການປິ່ນປົວຕົວຢ່າງ

ຈຸລັງ RAW 264.7 ໄດ້ມາຈາກການເກັບກໍາວັດທະນະທໍາປະເພດອາເມລິກາ (ATCC, Manassas, VA, USA) ແລະປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງ DMEM ທີ່ມີຢາຕ້ານເຊື້ອ 1% ແລະ 5.5% FBS. ຈຸລັງໄດ້ຖືກອົບໃນບັນຍາກາດທີ່ມີຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຂອງ 5% CO2 ທີ່ 37 ° C. ເພື່ອກະຕຸ້ນຈຸລັງ, ຂະຫນາດກາງໄດ້ຖືກທົດແທນດ້ວຍຂະຫນາດກາງ DMEM ສົດ, ແລະ lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ຢູ່ທີ່ 1.μg/mL ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນການມີຫຼືບໍ່ມີ SDE (200 ຫຼື 400μg/ml) ເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງເພີ່ມເຕີມ.

2.3.2. ການກໍານົດ Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), ແລະ Interleukin-6 (IL-6) ການຜະລິດ

ຈຸລັງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ SDE ແລະກະຕຸ້ນດ້ວຍ LPS ເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ. ບໍ່ມີການຜະລິດໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວັດແທກ nitrite ໂດຍໃຊ້ reagent Griess ອີງຕາມການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ [12]. ຄວາມລັບຂອງ cytokines ອັກເສບ PGE2, TNF-α, ແລະ IL-6 ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ຊຸດ ELISA (ລະບົບ R&D) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ. ຜົນກະທົບຂອງ SDE ຕໍ່ NO ແລະການຜະລິດ cytokine ໄດ້ຖືກກໍານົດຢູ່ທີ່ 540 nm ຫຼື 450 nm ໂດຍໃຊ້ Wallac EnVision™ເຄື່ອງອ່ານ microplate (PerkinElmer).

2.4. ການປະເມີນຜົນຂອງກິດຈະກໍາ Antiosteoarthritisໃນ Vivo

2.4.1. ສັດ

ໜູ Sprague-Dawley ເພດຊາຍ (ອາຍຸ 7 ອາທິດ) ໄດ້ຊື້ມາຈາກ Samtako Inc. (Osan, ເກົາຫຼີ) ແລະ ຢູ່ໃນສະພາບທີ່ຄວບຄຸມດ້ວຍວົງຈອນແສງ/ມືດ 12 ຊົ່ວໂມງ.°C ແລະ% ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ. ໜູໄດ້ຖືກສະໜອງໃຫ້ອາຫານຫ້ອງທົດລອງ ແລະນ້ຳໂຄສະນາ. ຂັ້ນຕອນການທົດລອງທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງສະຖາບັນສຸຂະພາບແຫ່ງຊາດ (NIH) ແລະໄດ້ຮັບການອະນຸມັດໂດຍຄະນະກໍາມະການດູແລສັດ ແລະການນໍາໃຊ້ຂອງມະຫາວິທະຍາໄລ Daejeon (Daejeon, ສາທາລະນະລັດເກົາຫຼີ).

2.4.2. Induction ຂອງ OA ກັບ MIA ໃນຫນູ

ສັດໄດ້ຖືກ Random ແລະມອບໃຫ້ກຸ່ມການປິ່ນປົວກ່ອນທີ່ຈະເລີ່ມຕົ້ນຂອງການສຶກສາ (ຕໍ່ກຸ່ມ). ການແກ້ໄຂ MIA (3 mg/50μL ຂອງ 0.9% saline) ໄດ້ຖືກສັກໂດຍກົງເຂົ້າໄປໃນຊ່ອງ intra-articular ຂອງເຈັບທີ່ຫົວເຂົ່າຂວາພາຍໃຕ້ອາການສລົບ induced ມີປະສົມຂອງ ketamine ແລະ xylazine. ໜູໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນສີ່ກຸ່ມແບບສຸ່ມຄື: (1) ກຸ່ມນ້ຳເຄັມທີ່ບໍ່ມີການສັກຢາ MIA, (2) ກຸ່ມ MIA ດ້ວຍການສີດ MIA, (3) ກຸ່ມທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ SDE (200 mg/kg) ດ້ວຍການສັກຢາ MIA, ແລະ (4. ) ກຸ່ມປິ່ນປົວ indomethacin- (IM-) (2 mg/kg) ດ້ວຍການສັກຢາ MIA. ໜູຖືກໃຫ້ຢາດ້ວຍ SDE ແລະ IM 1 ອາທິດກ່ອນການສັກຢາ MIA ເປັນເວລາ 4 ອາທິດ. ປະລິມານຂອງ SDE ແລະ IM ທີ່ໃຊ້ໃນການສຶກສານີ້ແມ່ນອີງໃສ່ການຈ້າງງານໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ [10,13,14].

2.4.3. ການ​ວັດ​ແທກ​ການ​ແຜ່​ກະ​ຈາຍ​ນ​້​ໍາ​ຫນັກ Hindpaw​

ຫຼັງຈາກ OA induction, ຄວາມດຸ່ນດ່ຽງຕົ້ນສະບັບໃນຄວາມສາມາດໃນການຮັບນ້ໍາຫນັກຂອງ hindpaws ໄດ້ຖືກລົບກວນ. ເຄື່ອງທົດສອບຄວາມບໍ່ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ (ເຄື່ອງມື Linton, Norfolk, UK) ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປະເມີນການປ່ຽນແປງຂອງຄວາມທົນທານຕໍ່ນ້ໍາຫນັກ. ໜູຖືກວາງໄວ້ໃນຫ້ອງວັດແທກຢ່າງລະມັດລະວັງ. ແຮງຮັບນ້ຳໜັກຂອງແຂນຂາຫຼັງແມ່ນສະເລ່ຍໃນໄລຍະ 3 ວິນາທີ. ອັດ​ຕາ​ສ່ວນ​ການ​ແຜ່​ກະ​ຈາຍ​ຂອງ​ນ​້​ໍ​າ​ໄດ້​ຖືກ​ຄິດ​ໄລ່​ໂດຍ​ສົມ​ຜົນ​ດັ່ງ​ຕໍ່​ໄປ​ນີ້​: [ນ​້​ໍາ​ຫນັກ​ສຸດ hind limb / (ນ​້​ໍາ​ຫນັກ​ສຸດ hind limb + ນ​້​ໍາ​ຫນັກ​ໃນ hind limb ຊ້າຍ​)] × 100 [15].

2.4.4. ການວັດແທກລະດັບ Cytokine ຂອງເຊລັ່ມ

ຕົວຢ່າງເລືອດໄດ້ຖືກຈຸດສູນກາງຢູ່ທີ່ 1,500 g ເປັນເວລາ 10 ນາທີຢູ່ທີ່ 4 ° C; ຫຼັງຈາກນັ້ນ, serum ໄດ້ຖືກເກັບກໍາແລະເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ −70 ° C ຈົນກ່ວາການນໍາໃຊ້. ລະດັບຂອງ IL-1β, IL-6, TNF-α, ແລະ PGE2 ໃນເຊລັມໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍໃຊ້ຊຸດ ELISA ຈາກ R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.

2.4.5. ການວິເຄາະແບບ RT-PCR ແບບສົດໆ

RNA ທັງໝົດໄດ້ຖືກສະກັດອອກຈາກເນື້ອເຍື່ອຫົວເຂົ່າໂດຍໃຊ້ TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverse-transcribed into cDNA and PCR-amplified using a TM One Step RT PCR kit with SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, NY, USA). PCR ດ້ານປະລິມານໃນເວລາຈິງໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ລະບົບ Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). ລໍາດັບ primer ແລະລໍາດັບ probe ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ1. Aliquots ຂອງ cDNAs ຕົວຢ່າງແລະຈໍານວນເທົ່າທຽມກັນຂອງ GAPDH cDNA ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍອອກດ້ວຍ TaqMan® Universal PCR master mix ທີ່ປະກອບດ້ວຍ DNA polymerase ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). ເງື່ອນໄຂ PCR ແມ່ນ 2 ນາທີຢູ່ທີ່ 50 ° C, 10 ນາທີຢູ່ທີ່ 94 ° C, 15 s ທີ່ 95 ° C, ແລະ 1 ນາທີຢູ່ທີ່ 60 ° C ສໍາລັບ 40 ຮອບ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍແມ່ນໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ Ct ປຽບທຽບ (ຫມາຍເລກຮອບວຽນຂອງຈຸດຂ້າມຈຸດລະຫວ່າງ amplification plot ແລະ threshold), ອີງຕາມຄໍາແນະນໍາຜູ້ຜະລິດ.

ລາຄາ FOB:US $0.5 - 9,999 / ອັນ

ຈໍານວນຄໍາສັ່ງຂັ້ນຕ່ໍາ:100 ອັນ/ອັນ

ຄວາມສາມາດໃນການສະຫນອງ:10,000 ຊິ້ນ / ຊິ້ນຕໍ່ເດືອນ